Monkeypox Virus Real Time PCR Kit
उत्पादन विवरण
अभिप्रेत प्रयोग
यो वास्तविक समय PCR प्रणाली प्रयोग गरेर मानव सीरम वा घाव exudate नमूनाहरूमा Monkeypox भाइरस पत्ता लगाउन प्रयोग गरिन्छ।
परीक्षण सिद्धान्त
यो उत्पादन फ्लोरोसेन्ट प्रोब-आधारित Taqman® वास्तविक समय PCR परख प्रणाली हो।विशेष प्राइमर र प्रोबहरू Monkeypox भाइरसको F3L जीन पत्ता लगाउनको लागि डिजाइन गरिएको हो।मानव संरक्षित जीनलाई लक्षित गर्ने आन्तरिक नियन्त्रणले नमूना सङ्कलन, नमूना ह्यान्डलिङ र वास्तविक-समयको पीसीआर प्रक्रियालाई गलत-नकारात्मक नतिजाहरूबाट बच्न अनुगमन गर्दछ।किट पूर्ण रूपमा प्रिमिक्स लाइओफिलाइज्ड प्रणाली हो, जसमा मन्कीपक्स भाइरस पत्ता लगाउन आवश्यक सामग्रीहरू समावेश छन्: न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन इन्जाइम, यूडीजी इन्जाइम, प्रतिक्रिया बफर, विशिष्ट प्राइमर र प्रोब।
मुख्य सामग्री
प्रदान गरिएका अवयवहरू तालिकामा सूचीबद्ध छन्।
| अवयवहरू | प्याकेज | सामाग्री |
| Monkeypox भाइरसLyophilized Premix | 8 स्ट्रिप पीसीआर ट्यूब× 6 पाउचहरू | प्राइमर, प्रोब, dNTP/dUTP मिक्स, Mg2+, Taq DNA पोलिमरेज, UDG इन्जाइम |
| MPV सकारात्मक नियन्त्रण | 400 μL × 1 ट्यूब | लक्ष्य जीन समावेश DNA अनुक्रम |
| MPV नकारात्मक नियन्त्रण | 400 μL × 1 ट्यूब | मानव जीन खण्ड समावेश DNA अनुक्रम |
| विघटन समाधान | 1 एमएल × 1 ट्यूब | स्टेबलाइजर |
| अनुरूपताको प्रमाणपत्र | १ टुक्रा | / |
सञ्चालन प्रवाह
1. नमूनासङ्कलन:नमूना अनुसार बाँझ ट्युबहरूमा सङ्कलन गर्नुपर्छ
मानक प्राविधिक विशिष्टताहरु संग।
2. अभिकर्मक तयारी (अभिकर्मक तयारी क्षेत्र)
किटका कम्पोनेन्टहरू बाहिर निकाल्नुहोस्, स्ट्यान्डबाइ प्रयोगको लागि कोठाको तापक्रममा सन्तुलन राख्नुहोस्।
3. नमूना प्रशोधन (नमूना प्रशोधन क्षेत्र)
3.1 न्यूक्लिक एसिड निकासी
यो 200μL तरल नमूनाहरू, न्यूक्लिक एसिड निकासीको लागि सकारात्मक नियन्त्रण र नकारात्मक नियन्त्रण लिन सिफारिस गरिन्छ, भाइरल DNA निकासी किटहरूको सम्बन्धित आवश्यकताहरू र प्रक्रियाहरू अनुसार।
3.2 Lyophilized पाउडर विघटन र टेम्प्लेट थप
नमूनाहरूको संख्या अनुसार Monkeypox Virus Lyophilized प्रिमिक्स तयार गर्नुहोस्।एउटा नमूनालाई Lyophilized प्रिमिक्स पाउडर भएको PCR ट्यूब चाहिन्छ।नकारात्मक नियन्त्रण र सकारात्मक नियन्त्रण दुई नमूनाको रूपमा व्यवहार गर्नुपर्छ।
(1) Lyophilized प्रिमिक्स भएको प्रत्येक PCR ट्यूबमा 15μL घुलनशील समाधान थप्नुहोस्, त्यसपछि प्रत्येक PCR ट्यूबमा क्रमशः 5μL निकालिएका नमूनाहरू/नेगेटिभ कन्ट्रोल/पोजिटिभ कन्ट्रोल थप्नुहोस्।
(२) PCR ट्युबहरूलाई कडा रूपमा छोप्नुहोस्, PCR ट्युबहरूलाई हातले ल्यायोफिलाइज्ड पाउडर पूर्ण रूपमा विघटन र मिश्रित नभएसम्म फ्याँक्नुहोस्, तत्काल कम-स्पीड सेन्ट्रीफ्युगेशनद्वारा तरल पदार्थलाई PCR ट्यूबहरूको फेदमा जम्मा गर्नुहोस्।
(३) यदि पत्ता लगाउनको लागि सामान्य वास्तविक-समय पीसीआर उपकरण प्रयोग गर्नुहुन्छ भने, त्यसपछि प्रत्यक्ष रूपमा प्रवर्धन क्षेत्रमा PCR ट्यूबहरू स्थानान्तरण गर्नुहोस्;यदि पत्ता लगाउन BTK-8 प्रयोग गर्नुहुन्छ भने, त्यसपछि निम्न कार्यहरू गर्न आवश्यक छ: PCR ट्यूबबाट BTK-8 को प्रतिक्रिया चिप कुवामा 10 μL तरल स्थानान्तरण गर्नुहोस्।एउटा PCR ट्यूब चिपमा एउटा इनारसँग मेल खान्छ।पाइपिङ सञ्चालनको क्रममा, पिपेट ९० डिग्री ठाडो छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।एरोसोल ब्यारियर पिपेट टिपहरू इनारको बीचमा मध्यम बलको साथ राख्नुपर्छ र पिपेटलाई पहिलो गियरमा पुग्दा (बुलबुलेबाट बच्न) धकेल्न रोक्नुहोस्।इनारहरू भरिसकेपछि, सबै कुवाहरू ढाक्नको लागि प्रतिक्रिया चिप झिल्ली निकाल्नुहोस् र चिपलाई प्रवर्धन पत्ता लगाउने क्षेत्रमा स्थानान्तरण गरिन्छ।
4. पीसीआर प्रवर्धन (पत्ता लगाउने क्षेत्र)
4.1 PCR ट्युब/प्रतिक्रिया चिपलाई प्रतिक्रिया ट्याङ्कीमा राख्नुहोस् र प्रत्येक प्रतिक्रियाको नामलाई समान क्रममा राम्रोसँग सेट गर्नुहोस्।
4.2 पत्ता लगाउने प्रतिदीप्ति सेटिङहरू: (1) Monkeypox भाइरस (FAM);(2) आन्तरिक नियन्त्रण (CY5)।
4.3 निम्न साइकल प्रोटोकल चलाउनुहोस्
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio को प्रोटोकल:
| चरणहरू | तापक्रम | समय | साइकलहरू | |
| 1 | प्रि-डिनेचरेशन | 95 ℃ | २ मिनेट | 1 |
| 2 | विकृतीकरण | 95 ℃ | १० सेकेन्ड | 45 |
| एनीलिंग, विस्तार, प्रतिदीप्ति अधिग्रहण | ६० ℃ | ३० सेकेन्ड | ||
BTK-8 को प्रोटोकल:
| चरणहरू | तापक्रम | समय | साइकलहरू | |
| 1 | प्रि-डिनेचरेशन | 95 ℃ | २ मिनेट | 1 |
| 2 | विकृतीकरण | 95 ℃ | ५ सेकेन्ड | 45 |
| एनीलिंग, विस्तार, प्रतिदीप्ति अधिग्रहण | ६० ℃ | १४ सेकेन्ड | ||
5. नतिजा विश्लेषण (कृपया इन्स्ट्रुमेन्ट प्रयोगकर्ता पुस्तिका हेर्नुहोस्)
प्रतिक्रिया पछि, परिणामहरू स्वचालित रूपमा बचत हुनेछ।विश्लेषण गर्न "विश्लेषण" मा क्लिक गर्नुहोस्, र उपकरणले परिणाम स्तम्भमा प्रत्येक नमूनाको Ct मानहरू स्वचालित रूपमा व्याख्या गर्नेछ।नकारात्मक र सकारात्मक नियन्त्रण परिणाम निम्न "6. गुणस्तर नियन्त्रण" अनुरूप हुनेछ।
6. गुणस्तर नियन्त्रण
६.१ नकारात्मक नियन्त्रण: FAM च्यानलमा Ct वा Ct>40 छैन, CY5 च्यानलमा Ct≤40 सामान्य एम्प्लीफिकेशन कर्भको साथ।
6.2 सकारात्मक नियन्त्रण: सामान्य एम्प्लीफिकेशन कर्भको साथ FAM च्यानलमा Ct≤35, CY5 च्यानलमा सामान्य एम्प्लिफिकेशन कर्भको साथ Ct≤40।
6.3 माथिका सबै मापदण्डहरू पूरा भएमा परिणाम मान्य हुन्छ।अन्यथा, परिणाम अमान्य छ।
परिणाम व्याख्या
निम्न परिणामहरू सम्भव छन्:
| FAM च्यानलको Ct मान | CY5 च्यानलको Ct मान | व्याख्या | |
| 1# | Ct वा Ct> 40 छैन | ≤४० | Monkeypox भाइरस नकारात्मक |
| 2# | ≤४० | कुनै पनि परिणामहरू | Monkeypox भाइरस सकारात्मक |
| 3# | ४०–४५ | ≤४० | पुन: परीक्षण;यदि यो अझै 40 ~ 45 छ भने, 1# को रूपमा रिपोर्ट गर्नुहोस् |
| 4# | Ct वा Ct> 40 छैन | Ct वा Ct> 40 छैन | अवैध |
नोट: यदि अमान्य नतिजा आयो भने, नमूना सङ्कलन र पुन: परीक्षण गर्न आवश्यक छ।
अर्डर जानकारी
| उत्पादनको नाम | बिरालो।छैन | साइज | नमूना | आफ्नो जीवन | ट्रान्स।& Sto।अस्थायी। |
| Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 परीक्षण / किट | सीरम / घाव एक्स्युडेट | 12 महिना | -25～-15℃ |
